Radioaktive Markierung von NOTA mit Tc-99m -Tricarbonyl - eine Methode zur Markierung von Antikörpern

Ziel/Aim:

Cetuximab ist ein EGFR affiner Antikörper. Bei Markierungen mit Tc-99m werden hohe Temperaturen und Reduktionsmittel benötigt, um Kopplungen an Biomolekülen zu erzielen. Mit dem Komplexbildner 2,2',2''-(1,4,7-triazonane-1,4,7-triyl)triacetic acid (NOTA) ist eine schonende Komplexierung mit Tc-99m-Tricarbonyl möglich. Mit einem doppelt funktionalisierten Alexa488-Cetuximab-NOTA-Konjugat wurden Markierungsparameter angepasst und erste Zellstudien durchgeführt. Radioaktivität und Fluoreszenz konnten mit dem gleichen Antikörper parallel in der Zelle detektiert werden.
Methodik/Methods:
Die Markierung des Antikörpers mit Tc-99m[(CO)₃(H₂O)₃]⁺ wurde durch Anpassung der Reaktionsparameter und Reinigungsverfahren optimiert. Aussagen über Ausbeute, Qualität und Stabilität wurden mit Radio-HPLC und Radio-DC getroffen. Die Integrität des Antikörpers nach der Markierung wurde über SDS-Page untersucht. Zelluläre Studien mit EGFR-positiven A431- und EGFR-negativen MDA-Zellen beinhalteten Uptake und Bindungsstudien (Gamma-Counter) bei 4°C/37°C. Die Detektion der Fluoreszenz fand über ein invers messendes Fluoreszenzmikroskop (Zeiss) statt.
Ergebnisse/Results:
Eine Komplexierung Tc-99m[(CO)₃(H₂O)₃]⁺ mit NOTA konnte erzielt werden. Die Markierung des modifizierten Antikörpers zeigte eine radiochemische Reinheit von > 95%. Nach 24h konnten noch 75% des markierten Antikörpers nachgewiesen werden. Zelluläre Untersuchungen ergaben max. spezifische Aufnahmen bei A431-Zellen nach 1h (48%/0,5Mio.Zellen/2MBq) mit ca. 30% Membran gebundenem Anteil, welcher nach 24h abnimmt (1,5%/0,5Mio.Zellen/2MBq). Ein fluoreszenzmikroskopischer Bindungsnachweis konnte erbracht werden.
Schlussfolgerungen/Conclusions:
Eine Markierung des modifizierten Cetuximabs mit Tc-99m[(CO)₃(H₂O)₃]⁺ konnte entwickelt werden. Geeignete Parameter und Reinigungsverfahren wurden etabliert. Bindungsstudien zeigten eine spezifische Anreicherung an A431-Zellen mit maximaler Aufnahme nach 1h. Die Anreicherung des modifizierten Antikörpers konnte über Fluoreszenzmikroskopie visualisiert werden.